吴佳尼出演过《都市山歌》《浪迹天涯》《男才女貌》《新醉打金枝》《封神榜之凤鸣岐山》《御姐归来》《暮白首》《雁归西窗月》《我们的婚姻》《北上广不相信眼泪》《少年杨家将》《出水芙蓉》等电视剧。
2001年，吴佳尼主演以音乐舞蹈为表现形式的电视轻喜剧《都市山歌》。2002年，她参演古装剧处女作《浪迹天涯》，饰演性格豪爽的温柔。2003年，吴佳尼出演都市情感剧《男才女貌》，与陆毅、林心如合作。2004年，她在都市情感剧《出水芙蓉》中饰演花样游泳队队员叶佳。
2005年11月，古装爱情轻喜剧《新醉打金枝》播出，吴佳尼在剧中饰演剑眉。2006年，古装剧《少年杨家将》播出，她饰演银镜公主耶律琼娥。2007年，她在古装神话剧《封神榜之凤鸣岐山》中饰演琵琶精胡喜媚。
2015年11月，职场情感剧《北上广不相信眼泪》播出，吴佳尼饰演“微信女孩”妙妙。2017年4月，复出后首部主演剧《御姐归来》开播，这是一部都市情感轻喜剧。2020年6月18日，她出演的古装剧《暮白首》开播。2021年5月20日，古装爱情剧《雁归西窗月》在腾讯视频独播，吴佳尼饰演皇后。2022年2月23日，都市剧《我们的婚姻》开播。
