《Smile光之美少女！》剧情围绕“微笑”与“快乐”主题展开，讲述五位少女为复活童话国度女王而对抗悲剧王国的故事；剧场版则聚焦光之美少女在绘本世界的冒险与危机。
故事以“微笑”和“快乐”为核心主题，背景设定在原本充满欢乐的童话国度被悲剧王国攻陷，女王被封印，精灵糖糖为复活女王，带着收集“治愈饰物”的任务来到地球。转学首日差点迟到的主角星空幸（部分资料称星空美幸）被一本从天而降的绘本砸中，意外获得变身能力，开启“拯救世界”的冒险。随后，她的四位同学日野茜、黄濑弥生、绿川直、青木丽华陆续加入，五人组成“光之美少女”战队。她们通过聚集象征幸福的“治愈饰物”，与悲剧王国的反派展开对抗，最终目标是复活童话国度的女王。剧情融合校园生活与奇幻战斗，强调友情、勇气与快乐的力量。
剧场版《光之美少女smile剧场版：儿童图画书里的世界都不协调》以“世界绘本大博览”为背景，五位主角相约参观时，银幕中的美少女妮可为逃避追杀逃入现实世界，反派金角、银角也随之而来。光之美少女与反派激战后，被妮可带入充满想象力的绘本世界。这里生活着桃太郎、拇指姑娘、一寸法师等经典绘本角色，五人根据喜好变身成心仪角色（如美幸化身公主），展开奇幻体验。然而，绘本世界逐渐失控，规则错乱、角色行为异常，光之美少女需修复混乱，恢复世界秩序。剧情通过“现实与幻想交织”的设定，拓展了原作的奇幻色彩，同时延续了TV版“快乐与勇气”的核心主题。
